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熟牛肉中的五種人工合成色素的測定

2011-08-30 [775]


1. 適用范圍
適用于熟牛肉中的五種人工合成色素(檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃 、亮藍(lán))的測定。


2. 提取
精確稱取2±0.2 g 粉碎后的熟牛肉,于50 mL聚丙烯離心管中,加入5 mL丙酮:水(90:10)混合溶液,渦動1min,均質(zhì)1min(1000rpm),4000 rpm離心5 min,轉(zhuǎn)移上清液于50 mL離心管中,殘?jiān)? mL丙酮:水(90:10)混合溶液重復(fù)提取兩次,合并上清液。上清液中加入10 mL石油醚(60-90℃),上下翻轉(zhuǎn)5次,4000rpm離心3min,除去石油醚層,下層于80 ℃氮吹至2 mL以下,加入定容至5 mL,混勻,待凈化。


3. 凈化
預(yù)處理:向Welchrom® P-WAX(60mg/3mL)中加入3 mL甲醇、3 mL水,流出液棄去;
上樣:將上述提取液加入柱中,流出液棄去,用5 mL水涮洗樣品管,轉(zhuǎn)入SPE柱;
淋洗:3 mL甲醇、3 mL甲醇:甲酸(6:4)依次過柱、3 mL正己烷過柱,小柱真空干燥5 min;
洗脫: 3*1 mL 5%甲醇洗脫,收集;
重新溶解:80 ℃氮吹至干,1 mL水復(fù)溶,渦動30 s,過0.22μm濾膜,待分析;


4. 檢測
色譜條件:
色譜柱: Ultimate® XB-C18 液相色譜柱(4.6 mm x 150 mm, 3 μm)

時間(min)

流動相A(%)

流動相B(%)

0

92

8

1

92

8

4

80

20

9

10

90

11

10

90

11.1

92

8

17

92

8

流動相:
A: 0.02mol/L乙酸銨水溶液(乙酸調(diào)節(jié)pH=4)
B: 甲醇
梯度洗脫程序見右圖
流速:0.7 mL/min
進(jìn)樣量: 20 μL
柱溫: 40°C
檢測波長: 254 nm
運(yùn)行時間:17 min
5. 附圖


1. 檸檬黃; 2.莧菜紅; 3.胭脂紅;4. 日落黃 ;5.亮藍(lán)
方法中使用到的耗材
1、 檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)品:WEL-S-0001
莧菜紅標(biāo)準(zhǔn)品:WEL-S-0002
胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)品:WEL-S-0003
日落黃標(biāo)準(zhǔn)品 :WEL-S-0004
亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品:WEL-S-0005
2、 固相萃取小柱:Welchrom® P-WAX(60mg/3mL,P/N:WSP050306)
3、 液相色譜柱:Ultimate® XB-C18,4.6 mm x 150 mm, 3 μm(Ult3B18415)
4、 13mm,孔徑0.22μm尼龍針孔濾膜(P/N: WEL-SFNY213022)
5、 12孔固相萃取裝置(WEL-Vac-12)